L-色氨酸是人體和動(dòng)物所必需的 8 種必需氨基酸之一,不能通過(guò)自身合成,只能通過(guò)食物來(lái)攝取。L-色氨酸又被稱(chēng)為第二必需氨基酸,目前廣泛應用于醫藥、食品、飼料等方面。隨著(zhù)生產(chǎn)技術(shù)的不斷進(jìn)步,微生物法替代了傳統的化學(xué)合成法和蛋白質(zhì)水解法,占據了市場(chǎng)主導地位,主要產(chǎn)地集中在歐美、日本等少數地方。但目前在產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn) L-色氨酸的過(guò)程中,均會(huì )存留少量雜質(zhì),因此下游的分離純化工藝非常重要。
比旋光度是旋光物質(zhì)的重要物理常數,可以用來(lái)檢測 L-色氨酸的純雜程度,進(jìn)而為提升L-色氨酸的生產(chǎn)效率提供參考。
2.1 儀器
GP80全自動(dòng)旋光儀
3.1 實(shí)驗步驟
(1) 色氨酸溶液
精準稱(chēng)取約 1.0g 色氨酸,加入適量水,在水?。?/span>60℃)中溫熱溶解,定容至 100mL, 制成每 1 mL 約含 10mg 的溶液。
(2) 空白測試
將控溫旋光管用三級水清洗 3 次以上,然后加滿(mǎn)水至管路中無(wú)氣泡。將旋光管水平放置于旋光儀中,連接溫控線(xiàn),設置溫度 20℃,等待儀器溫度穩定后,點(diǎn)擊“清零”。
(3) 樣品測試
將控溫旋光管取出,用色氨酸溶液清洗 3 次以上,然后加滿(mǎn)溶液至管路中無(wú)氣泡。等待儀器溫度穩定后,點(diǎn)擊“測試”。
3.2 儀器參數
樣品名稱(chēng):色氨酸 | 測試次數:3 |
樣品質(zhì)量:0.99952g | 顯示位數:3 |
試管長(cháng)度:10cm | 結果類(lèi)型:比旋度 |
溫度:20℃ | 測量準確:高精度測量 |
4.1 實(shí)驗結果
編號 | 測試溫度 | 比旋度 | 平均值 |
1 |
20℃ | -32.085 |
-32.11 |
-32.135 | |||
-32.135 | |||
2 | -32.135 | ||
-32.035 | |||
-32.135 |
4.2 討論
兩次平行的結果均符合藥典中對于 L-色氨酸比旋度的要求(-30.0°~-32.5°),此實(shí)驗能夠為L-色氨酸的純度測定提供一定的依據。
[1] 陳榮慶,劉偉,等.L-色氨酸的研究進(jìn)展[J].安徽農業(yè)科學(xué),2014,(14):4438-4440,4443.
[2] 國家藥典委員會(huì ).中華人民共和國藥典[M].二部.北京:中國醫藥科技出版社,2015:388.
1、本次實(shí)驗所用試劑和水,在沒(méi)有注明其他要求時(shí),均指分析純試劑和三級水。
2、色氨酸略溶于水(1.1g/100mL,25℃),建議在水浴中溫熱溶解。建議先加入 50-60 mL 的水,攪拌溶解大部分樣品,再添加少量水至樣品全部溶解,再于冰水中冷卻至 20℃。后將樣品液和清洗液全部轉移至 100mL 容量瓶中,定容。也可使用超聲波儀器加速溶解。
3、溶液配制好后建議在 30min 內測試完畢。
4、可通過(guò)旋光管兩側的透光玻璃孔觀(guān)察管中是否有氣泡,同時(shí)檢查并擦凈玻璃上的水漬和污跡。
5、為旋光管更換樣品液時(shí)建議將儀器的溫控關(guān)閉。操作方法是將參數設置里的“溫度” 選項關(guān)閉。